计量学报

作者：王蕾蕾,王霞,邢德纯,董莲华,杨靖亚

单位：1. 上海海洋大学食品学院,上海2 01306; 2. 中国计量科学研究院前沿计量科学中心,北京 100029;

关键词：计量学;PIK3CA;基因突变;数字PCR;定量

基金：国家质量基础共性关键技术重点研发专项 (2017YFF0204605);中国计量科学研究院基本科研业务费 (AKY1929)

PIK3CA突变检测是实现肿瘤个体化治疗的重要预测因子。以PIK3CA为目的基因,选择E542K、E545K、H1047R三个热点突变,建立对其准确定量检测的微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)方法。优化退火温度、引物探针浓度等条件,对方法特异性、线性范围、重复性等方面进行考察。结果表明,建立的ddPCR检测方法精密度好,在突变丰度(0.05~82.75)%范围内相对标准偏差值介于(0.392~14.031)%,准确性高,与重量法的相关系数达到99.91%、99.98%、99.94%;在突变丰度0.2%以上,方法的重复性可达5%以内;在突变丰度0.2%以下,重复性保持在15%以下。在20μL反应体系中3个热点突变的空白限分别为0.03%、 0.04%、0.04%,检测下限和定量下限均为0.05%。因此,所建立的PIK3CA基因E542K、E545K及H1047R位点突变的ddPCR参考测量灵敏度高,重复性好,在癌症诊断、个体化用药指导和预后方面具有良好的应用。

来源：2023年第3期

《计量学报》期刊编辑部

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